Il existe deux invocations distinctes de la Vierge de Guadalupe qui, bien que partageant le même nom et toponyme, possèdent des origines, des iconographies et des histoires séparées. L'une est médiévale, originaire d'Estrémadure en Espagne, et l'autre date du XVIe siècle, du Tepeyac au Mexique.
La Vierge de Guadalupe d'Estrémadure, associée à une apparition à un berger au XIIIe siècle, est la patronne de l'Estrémadure et a été couronnée Reine de l'Hispanité en 1928. Elle est représentée comme une Vierge avec l'Enfant, dans l'esthétique des "vierges noires" ibériques.
En revanche, la Vierge de Guadalupe du Mexique, apparue à Juan Diego en 1531, est la patronne du Mexique, des Amériques et des Philippines, servant de symbole d'identité nationale. Son iconographie montre la Vierge seule, debout sur une lune noire et entourée de rayons solaires.
Le nom "Guadalupe" dérive du fleuve espagnol et signifie "fleuve/miroir de lumière". Le partage du nom a entraîné des confusions, mais l'Église et les érudits soulignent la distinction entre les deux dévotions. En 2023, les sanctuaires des deux Vierges ont conclu un accord de "sanctuaires frères", promouvant la vénération mutuelle entre les deux pays.