Existem duas invocações distintas da Virgem de Guadalupe que, apesar de partilharem o mesmo nome e topónimo, possuem origens, iconografias e histórias separadas. Uma é medieval, originária da Extremadura, em Espanha, e a outra data do século XVI, do Tepeyac, no México.
A Virgem de Guadalupe de Extremadura, associada a um aparecimento a um pastor no século XIII, é padroeira da Extremadura e foi coroada Rainha da Hispanidade em 1928. É representada como uma Virgem com o Menino, dentro da estética das "virgens negras" ibéricas.
Por outro lado, a Virgem de Guadalupe do México, que apareceu a Juan Diego em 1531, é padroeira do México, das Américas e das Filipinas, sendo um símbolo de identidade nacional. A sua iconografia mostra a Virgem sozinha, sobre uma lua negra e com raios solares.
O nome "Guadalupe" deriva do rio espanhol e significa "rio/espelho de luz". A partilha do nome levou a confusões, mas a Igreja e estudiosos enfatizam a distinção entre as duas devoções. Em 2023, os santuários de ambas as Virgens firmaram um acordo de "santuários irmãos", promovendo a veneração mútua entre os dois países.